1. 競爭性反應

這個檢測方法依靠單克隆抗體來識別17β-Estradiol。樣品中的17β-Estradiol和一個17β-Estradiol-酶結合物預先混合然后加入到每個微孔中競爭與包被在微孔表面的特異性抗體。樣品中17β-Estradiol的濃度如果高于17β-Estradiol -酶結合物，17β-Estradiol將主要與抗體結合。反之樣品中17β-Estradiol的濃度如果低于于17β-Estradiol -酶結合物，17β-Estradiol -酶結合物將主要與抗體結合。

2. 顯色反應

通過洗滌步驟去除沒有反應的17β-Estradiol和過量的17β-Estradiol -酶結合物。和微孔板中抗體結合的17β-Estradiol -酶結合物催化底物發(fā)生反應產生有色物質。通過一個孵育期用烯酸終止反應。樣品中17β-Estradiol的濃度越高導致結合到微孔板抗體上的17β-Estradiol -酶結合物越少，從而產生的顏色越淡，吸光度越低。

3. 定量分析

利用已知濃度的17β-Estradiol標準的濃度和在450nm條件下獲得的吸光度值做出一條劑量反應曲線（標準曲線）。把樣品的吸光度值用內插法插入到標準曲線中可以精確的計算出樣品中BPA的濃度。

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